多地PCR实验室“假阳性”曝光,如何应对当下困局?

多地PCR实验室“假阳性”曝光,如何应对当下困局?


近期不断发生的几起核酸检测“假阳性”事件,对于奋战在抗疫前线核酸检测人员而言,除了应对大规模、巨量的“新冠”样本检测任务外,应该警惕核酸检测中的“异常”情况。

01、PCR技术与“假阳性”


多地PCR实验室“假阳性”曝光,如何应对当下困局?(图1)

PCR技术具有灵敏度高、特异性好的优点,新型冠状病毒检测的“金标准”正是PCR核酸检测技术。但 PCR 技术的高灵敏度是一把双刃剑,理论上一个核酸分子的污染都有可能引起结果的假阳性。而核酸检测工作环节繁复,在采样和检测环节,均存在引发“假阳性”样本出现的可能性,其中实验室环节是形成“假阳性”的主要风险点。

根据PCR检测流程,一份样本从进入实验室到出结果,需要经过标本前处理、核酸提取、试剂配制、加样、上机扩增、结果分析等多个环节,每一个环节处理不慎都会导致结果“假阳性”。

首先是标本间交叉污染。如收集标本的采样管被污染;采样管在开盖时,形成的病毒气溶胶导致的样本间污染;核酸提取过程中,移液器或枪头的污染。

其次是阳性质控污染。从核酸提取到扩增的过程中,每板检测都会有阴性和阳性质控品,如操作不慎,阳性质控也可能会污染样本;

另外有仪器、试剂或耗材的原因。核酸检测仪器一直处于满负荷、连续工作状态,势必会影响升降温过程,或是个别试剂存在非特异性扩增现象,或是PCR板封膜不严,PCR管在加热过程中出现融化、体积变化、漏盖等情况,都有可能导致PCR扩增曲线出现“翘尾”现象甚至假阳性。

然而,最令PCR实验室头疼,或是核酸检测人员“谈虎色变”的是气溶胶污染。PCR实验室中,阳性标本或阳性质控的扩增产物若处理不当、实验室管理不善、操作不够规范,极易形成PCR产物气溶胶,而污染实验环境从而出现假阳性,且短期内很难清除。这一问题表面上可通过更换不同的试剂予以解决,但目前新冠试剂大多都采用相同的引物探针序列,扩增区域大同小异,因此实际上也不能很好地解决扩增产物污染问题。所以实验室除了配备不同扩增片段的复检试剂外,如何规范地做好日常维护,有效预防或清除气溶胶污染就显得尤为重要,应该是日常核酸检测中的“重中之重”。


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02、核酸气溶胶污染传统解决方案
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传统核酸气溶胶污染解决办法通常主要使用商品化DNA去除剂,并辅以紫外灯照射,甚至是实验室空置、通风等手段。商品化的DNA去除剂,通常通过手持喷壶,在空气中喷洒清除剂,清除气溶胶效果有限,同时还有抑制后续PCR扩增的风险;常规的紫外灯照射,对大片段的核酸气溶胶可能会有效,但对小于300bp的PCR扩增产物来说,效果不明显;在常态化核酸检测的背景下,大多PCR实验室都是满负荷运转,通过空置和通风来解决气溶胶污染也不现实。

03、核酸气溶胶污染传统解决方案

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熠创鼎惠(上海)生物科技有限公司致力于为PCR实验室提供高效安全的核酸气溶胶污染解决方案,改变“手工清除并等待,实现“智能清除即检测”,引领PCR实验室变革创新核酸气溶胶清除方法,降低实验室PCR气溶胶污染概率并杜绝污染扩散的发生。

Ares系列核酸气溶胶污染清除仪搭载工业级分散系统,将独特的核酸气溶胶清除剂转化为干雾状态的气溶胶清除因子。通过剪切雾化作用,加强雾化清除因子的清除能力,充分捕捉PCR气溶胶,并通过链式化学反应破坏核酸分子的共轭双键,继而通过光触媒反应,进一步降解PCR气溶胶,同时,通过气溶胶吸附屏物理吸附“漏网”的气溶胶,达到多维度高效清除扩增产物污染的效果。